非乙酰化cAMP/cGMP ELISA试剂盒;G蛋白激活检测抗体;点突变系列抗体火爆热销及隆重招商!!!

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如何定量检测cAMP和cGMP


背景介绍
   1958 年Sutherland 发现了cAMP(环磷酸腺苷),并因此获得了1971 年诺贝尔生理与医
学奖[1]. 1963 年Ashman 发现了cGMP(环磷酸鸟苷)[2]。50 年过去了,人们已明白cAMP、
cGMP 是在很多生理过程中发挥重要调节作用的第二信使分子。鸟苷酸环化酶可将GTP 催
化生成cGMP,cGMP 可以被磷酸二酯酶水解成GDP。激活鸟苷酸环化酶和抑制磷酸二酯酶
可以增加细胞内cGMP 的含量。cGMP 特异性磷酸二酯酶的抑制剂被用来治疗人类的某些疾
病,比如cGMP 特异性磷酸二酯酶类型5 的抑制剂(伟哥和西力士)被用来治疗ED(勃起
功能障碍);腺苷酸环化酶将ATP 催化生成cAMP,cAMP 可以被磷酸二酯酶水解成ADP。
激活腺苷酸环化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加细胞内cAMP 的含量。腺苷酸环化酶激活受
体的阻断剂和cAMP 特异性磷酸二酯酶的抑制剂被用来治疗人类的某些疾病,比如针对升
高cAMP 水平的β-肾上腺素受体的阻断剂被用于治疗心律失常、高血压、心肌梗塞和心力衰
竭等疾病。
   在五十年的研究历程中,从开始研究cAMP,cGMP 在各种生理过程中的调节作用,到
近几年与之相关的药物研发,药物筛选领域,人们一直在努力寻找一种快速、灵敏、特异性
和可重复地定量检测cAMP 和cGMP 含量的方法。


检测方法演变
cAMP,cGMP 分子量分别只有329.21 和345.21,在机体内的含量极低,为p mol/L 级
别,用一般的分析方法无法测定。70 年代一系列测定cAMP 和cGMP 的方法被发明出来,
最基本的原理有三种:分别是竞争性蛋白质结合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄层色
谱法[5]。在80 年代,放射性免疫分析法得到了广泛的应用和改进,由于这种方法采用放射
性核素标记,应用范围受到一定限制,为了进一步提高检测的灵敏度和操作的安全性,进入
90 年代又陆续发明了各种酶标记法和化学发光法的竞争性ELISA 检测试剂盒,这一类检测
方法的根本原理都是基于抗体抗原的免疫反应,所有这些试剂盒中采用的抗体全部是兔抗血
清或者是经过特异亲和提纯之后的抗cAMP 或cGMP 的兔多抗,毫无疑问,兔多抗在约四
十年的cAMP,cGMP 定量检测中做出了巨大贡献,但同时它也有着明显的缺陷:
   1,兔多抗对cAMP,cGMP 的特异性不高,会与其他核苷类似分子发生交叉反应,尽
管可以通过特异亲和提纯降低交叉,但仍然无法消除交叉;
   2,兔多抗对cAMP 和cGMP 的亲和力受高浓度的二价阳离子(比如Mg2+和Ca2+)的影
响;
   3,兔多抗在制备的过程中存在个体差异和批间差异,难以保证检测数据的重复性;
   4,兔多抗试剂盒在cAMP,cGMP 样品的处理上也需要进行乙酰化处理,这与兔多克
隆抗体制备方法有必然关系,如果不乙酰化将无法达到检测所需的灵敏度。
所以无论标记方法如何革新,不改进抗体,仍然不能从根本上迎来cAMP,cGMP 定量
检测的变革。


cAMP 和cGMP 单克隆抗体成功开发
    NewEast Biosciences(纽斯特)公司的科学家经过两年的研发,筛选了4 万多个克隆,
终于从中发现了高特异性,高亲和力的cAMP 和cGMP 单克隆抗体。并成功构建了世界上
唯一的基于单抗的cAMP 和cGMP ELISA 检测试剂盒。这个cAMP(cGMP)单抗对非乙酰
化的cAMP(cGMP)的特异性识别能力是其对cGMP(cAMP)、ATP(GTP)以及其他核
苷类似物识别能力的108 倍以上,这相比于以往的多抗试剂盒大大提高了cAMP (cGMP) 检
测的灵敏性和特异性,并且极大的降低了试剂盒的批间差异,提供了长久有效地可重复性检
测,也彻底摆脱了繁琐的乙酰化过程和对科研人员健康不利的乙酰化挥发试剂。
该试剂盒一经推出,得到了学术界的广泛认可,几年来陆续发表论文十多篇。


已发表论文:
1. Castro, L. R., J. Schittl, et al. (2010). "Feedback control through cGMP-dependent
protein kinase contributes to differential regulation and compartmentation of cGMP in
rat cardiac myocytes." Circ Res 107(10): 1232-1240.
2. Guo, D., J. J. Zhang, et al. (2009). "Stimulation of guanylyl cyclase-D by
bicarbonate." Biochemistry 48(20): 4417-4422.
3. Long, Y., Q. Li, et al. (2011). "Molecular analysis, developmental function and
heavy metal-induced expression of ABCC5 in zebrafish." Comp Biochem Physiol B
Biochem Mol Biol 158(1): 46-55.
4. Tseng, K. Y., A. Caballero, et al. (2011). "Inhibition of Striatal Soluble Guanylyl
Cyclase-cGMP Signaling Reverses Basal Ganglia Dysfunction and Akinesia in
Experimental Parkinsonism." PLoS One 6(11): e27187.
5. Zhang, Y., Y. Sun, et al. (2011). "Molt-inhibiting hormone from Chinese mitten crab
(Eriocheir sinensis): Cloning, tissue expression and effects of recombinant peptide on
ecdysteroid secretion of YOs." Gen Comp Endocrinol 173(3): 467-474.
6. Zheng, X., L. Ying, et al. (2011). "Role of sulfhydryl-dependent dimerization of
soluble guanylyl cyclase in relaxation of porcine coronary artery to nitric oxide."
Cardiovasc Res 90(3): 565-572.
7. Tsai, E. J., Y. Liu, et al. (2012). "Pressure-overload-induced subcellular
relocalization/oxidation of soluble guanylyl cyclase in the heart modulates enzyme
stimulation." Circ Res 110(2): 295-303.
8. Andre, L., J. Fauconnier, et al. (2012). "Subendocardial Increase in Reactive Oxygen Species
Production Affects Regional Contractile Function in Ischemic Heart Failure." Antioxid Redox
Signal.
9. Makiya, M., M. Dolan, et al. (2011). "Structural basis of anthrax edema factor neutralization
by a neutralizing antibody." Biochemical and Biophysical Research Communications. ???
10. Skrabalova, J., J. Neckar, et al. (2012). "Antiarrhythmic effect of prolonged morphine
exposure is accompanied by altered myocardial adenylyl cyclase signaling in rats." Pharmacol
Rep 64(2): 351-359.
11. Ying, L., X. Xu, et al. (2012). "Heterogeneity in relaxation of different sized porcine
coronary arteries to nitrovasodilators: role of PKG and MYPT1." Pflugers Arch 463(2):
257-268.
参考文献:
1, Sutherland, et al. Cyclic AMP. Academic Press. Science 174, 392 (1971).
2, Ashman, et al, Biochem Biophys Res Commun, 11, 330 (1963).
3, Honma, M. et al., Biochem. Med.,18, 257 (1977).
4,Goldberg, M. L., Clin. Chem., 23, 576 (1977).
5, Trifilo, R. M. et al., J. Chromatogr., 116, 465 (1976).


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